1992年，参演长春电影制片厂出品、乔克吉执导的剧情片《无使命行动》。1993年，参演由袁和平执导、叶广俭编剧、李连杰等主演的动作电影《太极张三丰》。同年在元奎执导，李连杰、李嘉欣等主演的动作电影《方世玉》中饰演余童。同年出演由洪金宝执导，狄龙、杨凡等主演的武侠剧情片《神州第一刀》，饰演步亭。1994年，在杨洁执导的历史古装剧《西施》中饰演王孙雄。1996年出演张华勋执导的古装历史电视剧《隋唐演义》。

2010年，参与拍摄由鞠觉亮执导的大型古装电视剧《新水浒传》，饰演美髯公朱仝。

2012年，与王挺、崔波、刘佩琦等共同主演由导演游达志和编剧刘奎序联手打造的红色经典情感传奇大戏《我的传奇老婆》，于彦凯一人分饰两角。同年担纲古装动作电影《水浒英雄谱》之《金大坚与萧让》的男一号，饰演有一手雕石治印的盖世绝技的玉臂匠金大坚。同年与陈键锋、元彪、陶欣然共同主演由游达志执导的年代动作剧《十二金钱镖》。

2013年在郑嘉颖、韩雪等主演的电视剧《叶问》中饰演撸大哥。

2014年，在尚敬执导、范伟和毛孩主演的电视剧《小宝和老财》中饰演日军军官劈谷。

2015年，出演由张峰执导、何润东和张俪联袂主演的年代传奇大剧《玄武》。同年出演由郑嘉颖、唐艺昕、林佑威等主演的民国传奇大剧《太极宗师之太极门》。

2016年，参演网剧《老炮儿》。同年参演由搜狐视频和飞鱼娱乐联合出品，蒋龙、代文雯等携手罗家英、崔成国等演员出演的任性穿越武侠网剧《大侠日天》，在剧中饰演高人刘尘风。同年与孙浩、郑伊涵等共同主演刘德甫执导的海南百部电影系列之《北纬十八度爱情》。同年与骆达华、王建新等主演黄建业执导动作电影《狼回头》。同年参与拍摄的古装电视剧《武神赵子龙》开播，在剧中饰演袁绍旗下的勇猛悍将文丑。同年出席电视连续剧《陈炉古镇》在浙江湖州举行的剧组转场暨特约演员海选仪式。

2017年，与周卫涛共同主演由刘亚军执导、任舯泽担任制片人的系列电影《天罚》，饰演于局长。

于彦凯凭借一身过硬的真功夫，曾经在电影《倚天屠龙记》中饰演大反派成昆、电影《方世玉》中饰演余童，在数十部动作电影中塑造了各种类型的银幕形象。自幼练就的武术功底，加之二十年的动作戏拍摄经验，令于彦凯对动作电影、武侠片有着独特情结。